Test diagnóstico para la detección de anticuerpos frente al Pneumovirus aviar (APV).
DIMUNE S.A.
IDEXX APV es un ensayo inmunoenzimático de IDEXX para la detección de anticuerpos frente al Pneumovirus aviar (APV) en suero de pollo y pavo.
Test diagnóstico.
Información general
El Pneumovirus aviar (APV) es un virus que afecta a pollos y pavos produciendo problemas respiratorios y reproductivos cuando actúa como patógeno primario, o también puede formar parte de un síndrome multifactorial conocido como Síndrome de la Cabeza Hinchada (SCH). El aislamiento viral de APV es una tarea muy difícil, por ello el diagnóstico a través de la serología puede ser de gran utilidad en el control de esta enfermedad. Esta prueba está diseñada para el control cuantitativo de lotes de pollos o pavos que hayan sido vacunados con vacunas vivas y/o inactivadas que contengan antígenos de APV tipo A, B o C así como para el control de aves libres de patógenos específicos (SPF).
Descripción y principios
Esta prueba está diseñada para medir los niveles relativos de anticuerpos frente a APV en suero de pollo y pavo. Se tapizan los 96 pocillos de las placas con antígeno viral. Tras la incubación de la muestra en el pocillo tapizado, el anticuerpo específico frente a APV presente en la misma formará un complejo con los antígenos virales. Después de eliminar por lavado el material no unido, se añade a los pocillos un conjugado que se une a los anticuerpos de pollo o pavo que quedaron unidos. El conjugado no unido se elimina mediante lavados de la placa y se agrega a los pocillos un substrato. El cambio de color resultante está directamente relacionado con la cantidad de anticuerpos anti-APV presentes en la muestra.
Reactivos | Volumen | ||
1 | Placa tapizada con Antígeno APV | 5 | |
2 | Control Positivo | 1 x 1,9 ml | |
3 | Control Negativo | 1 x 1,9 ml | |
4 | Conjugado | 1 x 50 ml | |
5 | Diluyente de la Muestra | 1 x 235 ml | |
A | Substrato TMB | 1 x 60 ml | |
B | Solución de Frenado | 1 x 60 ml |
Nota: Ver tabla al final del protocolo para las explicaciones de los símbolos utilizados en este protocolo y en las etiquetas del kit.
Preparación de las Muestras
Diluir las muestras 1:500 con el Diluyente de la Muestra antes de efectuar la prueba (por ejemplo, diluir 1 μl de la muestra con 500 μl de Diluyente). NOTA: NO DILUIR LOS CONTROLES. Asegurarse de cambiar las puntas de las pipetas cada vez que se tome una muestra. Mezclar bien las muestras antes de añadirlas a la placa tapizada con antígeno APV.
Procedimiento de la Prueba
Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18–26°C antes de usarlos. Los reactivos deberán mezclarse invirtiéndolos o agitándolos suavemente.
1 | Obtener la placa (o placas) tapizada con antígeno y anote la posición de las muestras. | ||||||
2 | Dispensar 100 μl de Control Negativo (CN) NO DILUIDO en los pocillos por duplicado. | ||||||
3 | Dispensar 100 μl de Control Positivo (CP) NO DILUIDO en los pocillos por duplicado. | ||||||
4 | Dispensar 100 μl de la muestra DILUIDA en los pocillos apropiados. | ||||||
5 | Incubar durante 30 minutos (±2 min.) a 18–26°C. | ||||||
6 | Eliminar el contenido líquido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 350 μl de agua destilada o desionizada 3–5 veces. Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de añadir el reactivo siguiente. Después del lavado final, eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpeándola sobre material absorbente. | ||||||
7 | Dispensar 100 μl de Conjugado en cada pocillo. | ||||||
8 | Incubar durante 30 minutos (±2 min.) a 18–26°C. | ||||||
9 | Repetir el paso 6. | ||||||
10 | Dispensar 100 μl de Substrato TMB en cada pocillo. | ||||||
11 | Incubar durante 15 minutos (±1 min.) a 18–26°C. | ||||||
12 | Dispensar 100 μl de la Solución de Frenado en cada pocillo. | ||||||
13 | Medir y anotar los valores de absorbancia a 650 nm, A(650). | ||||||
14 | Cálculos. | ||||||
15 | Interpretación:
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Almacenar los reactivos a 2–8°C. Los reactivos son estables hasta su fecha de caducidad, siempre y cuando hayan sido almacenados en las condiciones correctas.
• 5 bolsas de aluminio conteniendo una placa de 96 pocillos s/u.
IDEXX LABORATORIES INC. - Estados Unidos.
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