ÍNDICES

AVIAN REOVIRUS ANTIBODY TEST KIT

BIOLÓGICO

IDEXX REO es un ensayo inmunoenzimático de IDEXX diseñado para la detección de anticuerpos frente al Reovirus Aviar (REO) en suero de pollos.

DIMUNE S.A.

Expandir Todo

Fórmula, composición o componentes del producto

Usos o indicaciones terapéuticas

Dosis o posología

Preparación de las muestras

Diluir las muestras 1:500 con el Diluyente de la Muestra antes de efectuar la prueba (por ejemplo, diluir 1 μl de la muestra con 500 μl de Diluyente). NOTA: NO DILUIR LOS CONTROLES. Asegurarse de cambiar las puntas de las pipetas cada vez que se tome una muestra. Mezclar bien las muestras antes de añadirlas a la placa tapizada con antígeno REO.

Procedimiento de la Prueba

Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18–26°C antes de usarlos. Los reactivos deberán mezclarse invirtiéndolos o agitándolos suavemente.

1	Obtener la placa (o placas) tapizada con antígeno y anotar la posición de las muestras.
2	Dispensar 100 μl de Control Negativo (CN) NO DILUIDO en pocillos por duplicado.
3	Dispensar 100 μl de Control Positivo (CP) NO DILUIDO en pocillos por duplicado.
4	Dispensar 100 μl de muestra DILUIDA en los pocillos correspondientes. Las muestras pueden analizarse por duplicado, pero el análisis en un solo pocillo es también aceptable.
5	Incubar durante 30 minutos (± 2 min.) a 18–26°C.
6	Eliminar el contenido líquido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 350 μl de agua destilada o desionizada 3–5 veces. Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de añadir el reactivo siguiente. Después del lavado final, eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpeándola sobre material absorbente
7	Dispensar 100 μl de Conjugado a cada pocillo.
8	Incubar durante 30 minutos (± 2 min.) a 18–26°C.
9	Repetir el paso 6.
10	Dispensar 100 μl de Substrato TMB en cada pocillo.
11	Incubar durante 15 minutos (± 1 min.) a 18–26°C.
12	Dispensar 100 μl de la Solución de Frenado en cada pocillo.
13	Medir y anotar los valores de absorbancia a 650 nm, A(650).
14	Cálculos:
Controles
CNẋ= CN1 A(650) + CN2 A(650) 2		CPẋ= CP1 A(650) + CP2 A(650) 2
Criterios de Validación
CPẋ – CNẋ > 0,075		CNẋ≤ 0,150
En los ensayos no válidos, debe sospecharse de la técnica, y el ensayo tiene que repetirse siguiendo una revisión meticulosa del protocolo suministrado con el producto.
Muestras
M/P = Media de la Muestra – CNẋ CPẋ – CNẋ		Log10 del título = 1,09 (log10 M/P)+ 3,36*
*Relaciona el cociente M/P en una dilución de 1:500 con un título final
La presencia o ausencia de anticuerpos frente al virus REO se determina por medio de una relación entre el valor de A(650) de la muestra con la media del Control Positivo. El Control Positivo está normalizado y representa concentraciones significativas de anticuerpos anti-REO en el suero de pollo. La concentración relativa de anticuerpos en la muestra se determina a través del cálculo del cociente de la absorbancia de la muestra con respecto a la del Control Positivo, M/P. Los títulos finales de anticuerpos se calculan mediante la ecuación descrita arriba.
15	Interpretación:
Negativo		Positivo
M/P % ≤ 0,20		M/P % > 0,20
Un resultado positivo (títulos mayores que 396) indican vacunación u otra exposición a REO. Cada laboratorio debe establecer su propio criterio para inmunidad con respecto al título del anticuerpo, de acuerdo con la correlación del kit IDEXX REO con otros métodos de laboratorio actuales, y las respuestas de anticuerpos observadas en el pasado hacia vacunas específicas y protocolos de inmunización. La mejor manera de evaluar el estado inmunitario de un grupo de aves es mediante el control y el seguimiento de los títulos de anticuerpos en muestras representativas en función del tiempo. Los datos resultantes para el grupo permiten evaluar la distribución de los títulos de anticuerpos y analizar los cambios de título en el tiempo. Nota: IDEXX tiene a disposición instrumentos y sistemas de software para el cálculo de resultados y la elaboración de resúmenes de datos.

Precauciones y contraindicaciones

Conservación y Recomendaciones

Presentación

Empresa fabricante

Reactivos		Volumen
1	Placa tapizada con Antígeno REO	5
2	Control Positivo — suero de pollo anti REO diluido; conservado con azida de sodio	1 x 1,9 ml
3	Control Negativo — suero de pollo diluido, no reactivo en REO; conservado con azida de sodio	1 x 1,9 ml
4	Conjugado — conjugado (de cabra) anti-pollo: peroxidasa de rábano, conservado con gentamicina y Proclin	1 x 50 ml
5	Diluyente de la Muestra — solución tampón; conservada con azida de sodio	1 x 235 ml
A	Substrato TMB	1 x 60 ml
B	Solución de Frenado	1 x 60 ml