ÍNDICES

CHICKEN ANEMIA VIRUS ANTIBODY TEST KIT

KIT DE DIAGNÓSTICO

Immunoanálisis enzimático de IDEXX diseñado para detectar anticuerpos frente al Virus de la Anemia Aviar (CAV) en suero de pollo.

DIMUNE S.A.

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Fórmula, composición o componentes del producto

Forma del producto

Usos o indicaciones terapéuticas

Información general

El virus de la Anemia aviar (Chicken Anemia Virus – CAV) es un patógeno importante de las aves de corral y ha sido detectado en los pollos de engorde, los pollos de cría y en pollos SPF. El proceso de aislamiento del virus es largo y complejo. Los análisis de detección de anticuerpo indican la exposición al virus. Se ha empleado la técnica ELISA (ensayo inmunoabsorbente vinculado a enzimas) para detectar anticuerpos frente al CAV. Este método resulta muy útil en pruebas de gran escala para detectar la exposición al CAV en grupos de aves. El kit IDEXX CAV puede utilizarse para la realización de un muestreo para determinar la presencia de anticuerpos frente al virus de la Anemia Aviar o para evaluar la respuesta tras la vacunación.

Descripción y principios

El kit IDEXX CAV utiliza un pocillo de microtitulación tapizado con antígeno del virus de anemia en el pollo. Durante la primera incubación los anticuerpos frente al CAV que se encuentran en la muestra reaccionan con los antígenos inmovilizados. Después de un paso de lavado, se agrega un conjugado enzimático con anticuerpos monoclonales anti-CAV al pocillo. Si la muestra no contiene anticuerpos anti-CAV, el conjugado anti-CAV podrá reaccionar con el antígeno CAV. Por otra parte, si la muestra contiene anticuerpos anti-CAV, los anticuerpos monoclonales conjugados con enzima quedarán bloqueados e incapaces de reaccionar con el antígeno. Después de este período de incubación, el conjugado que no ha reaccionado se elimina mediante un lavado y se agrega una solución substrato y cromógeno. El substrato se convierte, en presencia de la enzima, en un producto que reacciona con el cromóforo y produce un color azul. La absorbancia a 650 nm, A(650), se mide utilizando un espectrofotómetro. Los resultados se calculan dividiendo la absorbancia A(650) de la muestra por la media A(650) del control negativo, lo cual resulta en un valor M/N (muestra a negativo). La proporción de anticuerpos frente a CAV es inversamente proporcional al valor A(650) y por lo tanto al valor M/N. La presencia de anticuerpos frente a CAV indica exposición previa al virus de la Anemia aviar.

Reactivos		Volumen
1	Placa tapizada con Antígeno CAV — conservado con Proclin	5
2	Control Positivo — suero de pollo anti-CAV diluido; conservado con azida de sodio	1 x 2,0 ml
3	Control Negativo — suero de pollo diluido, no reactivo en CAV; conservado con azida de sodio	1 x 2,0 ml
4	Conjugado — conjugado anti-CAV: HRPO; conservado con gentamicina y Proclin	1 x 50 ml
5	Diluyente de la Muestra — conservado con azida de sodio	1 x 235 ml
A	Substrato TMB	1 x 60 ml
B	Solución de Frenado	1 x 60 ml
C	Solución de Lavado Concentrada (10X) — conservada con gentamicina	1 x 235 ml
Otros componentes: Bolsa de plástico de cierre hermético reutilizable		1

Nota: Ver tabla al final del protocolo para las explicaciones de los símbolos utilizados en este protocolo y en las etiquetas del kit.

Dosis o posología

Preparación de las Muestras

Nota: La dilución de las muestras de suero puede realizarse en tubos de microdilución o directamente en la placa añadiendo la cantidad apropiada de suero habiendo dispensado previamente el Diluyente de la Muestra. Cambiar las puntas de pipeta para cada muestra. Las muestras deberán mezclarse completamente antes de dispensarlas en la placa tapizada. NO DILUIR LOS CONTROLES.

Exposición de campo – Para la detección de anticuerpos tras la exposición de campo al virus de la Anemia Aviar. Antes de comenzar el ensayo diluir las muestras de suero diez veces (1/10) con el Diluyente de la Muestra (ej. diluir 10 μl de la muestra con 90 μl del Diluyente de la Muestra).
Vacunación – Para la detección de un elevado nivel de anticuerpos (ej. debido a vacunación frente a CAV), diluir las muestras de suero 1/100 (ej. diluir 10 μl de la muestra con 990 μl de Diluyente de la Muestra). Esta dilución permitirá una diferenciación adecuada de las respuestas de muestras de un grupo vacunado. Las respuestas tras la vacunación dependerán de la dosis, vía de administración, edad del grupo, etc.

Procedimiento de la Prueba

Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18–26°C antes de usarlos. Los reactivos deberán mezclarse invirtiéndolos o agitándolos suavemente.

1	Obtener la Placa (o placas) tapizada(s) con antígeno y anotar la posición de las muestras. Si no se utiliza toda la placa, separar únicamente los pocillos necesarios para analizar las muestras. Guardar el resto de pocillos, junto con el desecante, en la bolsa de plástico de cierre hermético reutilizable y volver a almacenar a 2–8°C.
2	Dispensar 100 μl de Control Negativo (CN) NO DILUIDO en pocillos por duplicado.
3	Dispensar 100 μl de Control Positivo (CP) NO DILUIDO en pocillos por duplicado.
4	Dispensar 100 μl de muestra DILUIDA en los pocillos correspondientes. Las muestras pueden analizarse por duplicado, pero el análisis en un solo pocillo es también aceptable.
5	Incubar durante 60 minutos (± 5 minutos) a 18–26°C.
6	Eliminar el contenido líquido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 350 μl de Solución de Lavado 3-5 veces. Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de añadir el reactivo siguiente. Después del lavado final, eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpeándola sobre material absorbente.
7	Dispensar 100 μl de Conjugado a cada pocillo.
8	Incubar durante 30 minutos (± 2 minutos) a 18–26°C.
9	Repetir el paso 6.
10	Dispensar 100 μl de Substrato TMB en cada pocillo.
11	Incubar durante 15 minutos (± 1 minuto) a 18–26°C.
12	Dispensar 100 μl de la Solución de Frenado en cada pocillo.
13	Medir y anotar los valores de absorbancia a 650 nm, A(650).
14	Cálculos:
Controles
CNẋ= CN1 A(650) + CN2 A(650) 2		CPẋ= CP1 A(650) + CP2 A(650) 2
Criterios de Validación
CN 0,600		CPẋ/CNẋ≤ 0,50
En los ensayos no válidos, debe sospecharse de la técnica, y el ensayo tiene que repetirse siguiendo una revisión meticulosa del protocolo suministrado con el producto.
Muestras
M/N = Muestra A (650) CNẋ
La presencia o ausencia de anticuerpo frente a CAV se determina por la razón muestra a negativo (M/N) de cada muestra.
15	Interpretación:
Dilución 1/10
Negativo		Positivo
M/N > 0,60		M/N ≤ 0,60
Dilución 1/100
El estado inmunitario de los grupos vacunados se comprueba mejor mediante seguimiento de los niveles de anticuerpos en muestras representativas a lo largo del tiempo. Los perfiles resultantes del grupo permiten comprobar la distribución de los niveles de anticuerpos y un análisis de los cambios del estado inmunitario a lo largo del tiempo. Nota: IDEXX tiene a disposición instrumentos y sistemas de software para el cálculo de resultados y la elaboración de resúmenes de datos.

Precauciones y contraindicaciones

Conservación y Recomendaciones

Presentación

Empresa fabricante

Registro sanitario unificado No