ÍNDICES

SALMONELLA ENTERITIDIS ANTIBODY TEST KIT

BIOLÓGICO

IDEXX SE Ab X2 es un inmunoensayo enzimático de IDEXX para la detección de anticuerpos frente a Salmonella enteritidis (Se) en suero de los pollos.

DIMUNE S.A.

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Fórmula, composición o componentes del producto

Forma del producto

Usos o indicaciones terapéuticas

Precauciones y contraindicaciones

Prácticas de laboratorio

Los resultados óptimos se obtendrán siguiendo estrictamente este protocolo. El pipeteo cuidadoso, la coordinación y el lavado durante todo este procedimiento son necesarios para mantener la precisión y exactitud. Usar una punta de pipeta diferente para cada muestra y control.
No exponer las soluciones TMB a la luz fuerte o a cualquier agente oxidante. Manejar el Substrato TMB con material de cristal limpio o material plástico.
Todos los desechos deben descontaminarse adecuadamente antes de ser eliminados. Desechar el contenido de conformidad con las regulaciones locales, regionales y nacionales.
Extremar la precaución para evitar la contaminación de los componentes del kit. No verter los reactivos no utilizados de nuevo en contenedores.
No utilizar los kits pasada su fecha de caducidad y no mezclar componentes de kits con número de lote distintos.

Preparación de las muestras

Diluir las muestras 1:500 con el Diluyente de la Muestra antes de efectuar la prueba (por ejemplo, diluir 1 μl de la muestra con 500 μl de Diluyente). NOTA: NO DILUIR LOS CONTROLES. Asegurarse de cambiar las puntas de las pipetas cada vez que se tome una muestra. Mezclar bien las muestras antes de añadirlas a la placa tapizada con antígeno Se.

Procedimiento de la Prueba

Debe dejarse que todos los reactivos adquieran 18–26°C antes de usarlos. Los reactivos deberán mezclarse invirtiéndolos o agitándolos suavemente.

1	Obtener la placa (o placas) tapizada con antígeno y anotar la posición de las muestras. Si no se utiliza toda la placa, separar únicamente los pocillos necesarios para analizar las muestras. Guardar el resto de pocillos, junto con el desecante, en la bolsa de plástico de cierre hermético reutilizable y volver a almacenar a 2–8°C.
2	Dispensar 100 μl de control negativo (CN) NO DILUIDO en los pocillos por duplicado.
3	Dispensar 100 μl de control positivo (CP) NO DILUIDO en los pocillos por duplicado.
4	Dispensar 100 μl de muestra DILUIDA en los pocillos correspondientes. Las muestras puedenanalizarse por duplicado, pero el análisis en un solo pocillo es también aceptable.
5	Cubrir la placa e incubar durante 30 minutos (± 2 min.) a 18–26°C.
6	Eliminar el contenido líquido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 350 μl de agua destilada o desionizada 3–5 veces. Evitar que las placas se sequen entre los lavados y antes de añadir el reactivo siguiente. Después del lavado final, eliminar el fluido de lavado residual de cada placa golpeándola sobre material absorbente.
7	Dispensar 100 μl de Conjugado a cada pocillo.
8	Cubrir la placa e incubar durante 30 minutos (± 2 min.) a 18–26°C.
9	Repetir el paso 6.
10	Dispensar 100 μl de Substrato TMB en cada pocillo.
11	Cubrir la placa e incubar durante 15 minutos (± 1 min.) a 18–26°C.
12	Dispensar 100 μl de la Solución de Frenado en cada pocillo.
13	Medir y anotar los valores de absorbancia a 650 nm, A(650).
14	Cálculos:
Controles
CNẋ = CN1 A(650) + CN2 A(650) 2		CPẋ= CP1 A(650) + CP2 A(650) 2
Criterios de Validación
CPẋ – CNẋ > 0,075		CNẋ ≤ 0,150
En los ensayos no válidos, debe sospecharse de la técnica, y el ensayo tiene que repetirse siguiendo una revisión meticulosa del protocolo suministrado con el producto.
Muestras
M/P = Media de la Muestra – CNx CPẋ – CNẋ		Log10 del título = 1,50 (log10 M/P) + 3,47*
*Relaciona el cociente M/P en una dilución de 1:500 con un título final.
La presencia o ausencia de anticuerpos frente a Se se determina por medio de una relación entre el valor de A(650) de la muestra con la media del Control Positivo. El Control Positivo está normalizado y representa concentraciones significativas de anticuerpos anti-Se en el suero de pollo. La concentración relativa de anticuerpos en la muestra se determina a través del cálculo del cociente de la absorbancia de la muestra con respecto a la del Control Positivo, M/P. El cálculo del coeficiente muestra a positivo (M/P) diferenciará las muestras positivas de las negativas y proporcionará un nivel relativo de anticuerpos en la muestra. Los títulos finales de anticuerpos se calculan mediante la ecuación descrita arriba.
15	Interpretación:
Negativo		Positivo
M/P ≤ 0,20		M/P > 0,20
Un resultado positivo (títulos mayores que 264) indica vacunación u otra exposición a Se. Cada laboratorio debe establecer su propio criterio para inmunidad con respecto al título del anticuerpo, de acuerdo con la correlación del kit IDEXX SE Ab X2 con otros métodos de laboratorio actuales, y las respuestas de anticuerpos observadas en el pasado hacia vacunas específicas y protocolos de inmunización. La relación entre la inmunidad y el coeficiente M/P o el título no se ha establecido para este producto. La mejor manera de evaluar el estado inmunitario de un grupo de aves es mediante el control y el seguimiento de los títulos de anticuerpos en muestras representativas en función del tiempo. Los datos resultantes para el grupo permiten evaluar la distribución de los títulos de anticuerpos y analizar los cambios de título en el tiempo. Nota: IDEXX tiene a disposición instrumentos y sistemas de software para el cálculo de resultados y la elaboración de resúmenes de datos.

Conservación y Recomendaciones

Presentación

Empresa fabricante

Registro sanitario unificado No

Reactivos		Volumen
1	Placa tapizada con Antígeno Se	5
2	Control Positivo — suero de pollo anti-Se diluido, conservado con azida de sodio	1 x 1,9 ml
3	Control Negativo — suero de pollo diluido, no reactivo en Se, conservado con azida de sodio	1 x 1,9 ml
4	Conjugado — conjugado (de cabra) anti-pollo: HRPO, conservado con gentamicina y Kathon	1 x 50 ml
5	Diluyente de la Muestra — conservado con azida de sodio	1 x 235 ml
A	Substrato TMB	1 x 60 ml
B	Solución de Frenado	1 x 60 ml
Otros componentes: Bolsa de plástico de cierre hermético reutilizable		1